本申请公开了一种密执安棒状杆菌多重检测试剂、试剂盒及其应用。本申请的密执安棒状杆菌多重检测试剂中含有五条锁式探针,分别为Seq ID No.1所示序列的CMN锁式探针、Seq ID No.2所示序列的CMM锁式探针、Seq ID No.3所示序列的CMI锁式探针本申请的多重检测试剂,含有五个亚种的特异性锁式探针,能够同时对五个亚种进行特异性检测;提高了检测效率和检测质量。本申请的试剂及试剂盒,为密执安棒状杆菌高通量检测提供了一种简单有效的途径,适于检验检疫部门使用,为保障生物安全,避免病菌传播提供了有力的科学依据。